1、波譜法
該方法是根據有機磷農藥中某些官能團或水解、還原產(chǎn)物與特殊的顯色劑在特定條件下發(fā)生氧化、磺酸化、酯化、絡(luò )合等化學(xué)反應,產(chǎn)生特定波長(cháng)的顏色反應來(lái)進(jìn)行定性或定量(*) 測定。
2、色譜法
(1)薄層色譜法(TLC)
薄層色譜法是一種成熟的、應用也較廣的微量快速檢測方法。它在農藥殘留測定技術(shù)上有它*的用處,它既是重要的分離手段,又是定性、定量的分析方法。
檢測過(guò)程一般先用適宜的溶劑提取有機磷農藥,經(jīng)純化濃縮后,在薄層硅膠板上分離展開(kāi),顯色后與標準的有機磷農藥比較Rf值進(jìn)行定性測定或用儀器進(jìn)行定量測定。
(2)氣相色譜法(GC)
該方法是利用經(jīng)提取、純化、濃縮后的有機磷農藥注入氣相色譜柱,程序化升溫汽化后,不同的有機磷農藥在固相中分離,經(jīng)不同的檢測器檢測掃描繪出氣相色譜圖,通過(guò)保留時(shí)間來(lái)定性,通過(guò)峰或峰面積與標準曲線(xiàn)對照來(lái)定量
一次可同時(shí)測定多組份,簡(jiǎn)便快捷,靈敏度高,準確性也好。而色譜條件的最佳設定是氣相色譜技術(shù)的關(guān)鍵。
(3)高效液相色譜法(HPLC)
高效液相色譜法是在液相色譜柱層析的基礎上,引入氣相色譜理論并加以改進(jìn)而發(fā)展起來(lái)的色譜分析方法。高效液相色譜法在農藥殘留分析的應用越來(lái)越廣泛,是因為高效液相色譜法能適合分析沸點(diǎn)高而不太容易汽化、熱不穩定和強極性農藥及其代謝產(chǎn)物;且可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應和質(zhì)譜等聯(lián)用,易實(shí)現分析自動(dòng)化;同時(shí)一些新型檢測器的問(wèn)世在一定程度上提高了高效液相色譜法的檢測靈敏度。與氣相色譜法相比,不僅分離效能好,靈敏度高,檢測速度快,而且應用面廣。
3、色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法
色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)既發(fā)揮了色譜法的高分離能力,又發(fā)揮了質(zhì)譜法的高鑒別能力,能在多種殘留物同時(shí)存在的情況下對其進(jìn)行定性定量分析,尤其適合于多殘留分析。GC—MS是目前應用較為成熟且廣泛的色質(zhì)聯(lián)用技術(shù),它既具有氣相色譜的高分離性能,又具有質(zhì)譜準確鑒定化合物結構的特點(diǎn),可達到同時(shí)定性、定量檢測的目的,多用于農藥代謝物、降解物的檢測和多殘留檢測。
4、毛細管電泳
過(guò)去農藥多用HPIE和GC的方法測定,但最近可用CE分離測定。分離模式主要用CZE和毛細管膠束電動(dòng)色譜(MEKC)。毛細管電泳已用于奶、啤酒、谷物、水果、蔬菜和豬肉等食品中的農藥殘留的測定。
5、免疫分析技術(shù)
免疫分析技術(shù)應用于農藥殘留檢測方面的有放射免疫分析和酶免疫分析,目前酶免疫分析技術(shù)尤其是酶聯(lián)免疫分析在農藥殘留檢測中的應用研究在國外非?;钴S,應用也日趨普遍。
ELISA是利用抗原與抗體的特異性、可逆性結合反應為基礎的檢測方法,其檢測水平可達ng甚至pg級。ELISA廣泛應用于食品中農藥殘留如有機磷農藥、有機氯農藥、除草劑、氨基甲酸酯類(lèi)農藥、獸藥殘留(如氯霉素)、真菌毒素等的分析檢測上。作為一種快速篩選方法,EKSIA法在分析復雜基體樣品時(shí),因為基體干擾和交聯(lián)反應等問(wèn)題,往往存在假陽(yáng)性的問(wèn)題。因此如果需要對樣品進(jìn)行定量和確證還需要其他的分析方法。
6、酶抑制法
酶抑制法是研究最多且相對成熟的一種對部分農藥進(jìn)行殘留快速檢測的技術(shù)。酶抑制法測定農藥殘留應用較多的是乙酰膽堿酯酶,其對有機磷農藥較敏感,測定的靈敏度高,選擇性強,但價(jià)格昂貴,而且部分農藥對其的抑制并不明顯,需要附加氧化助劑或預處理,以提高對農藥檢測的靈敏度。于是有人研究用丁酰膽堿酯酶及動(dòng)植物酯酶代替乙酰膽堿酯酶。于基成等通過(guò)對大量的植物進(jìn)行篩選,初步獲得了活性較高的植物酶源,并利用酶抑制法快速檢測了蔬菜中敵百蟲(chóng)、對硫磷等有機磷農藥殘留。
7、生物傳感器
應用固定化AChE的薄膜和pH電極組裝的生物傳感器測定了有機磷和氨基甲酸酯類(lèi)農藥殘留。目前,生物傳感器法的研制與應用是農藥殘留檢測技術(shù)中的研究熱點(diǎn),在測定方法多樣化、提高測量靈敏度、縮短響應時(shí)間、提高儀器自動(dòng)化程度以及適應現場(chǎng)檢測能力等方面已取得了長(cháng)足進(jìn)步。
用于研究農藥殘留檢測的生物傳感器所使用的生物物質(zhì)主要為酶、全細胞、細胞器、受體或抗體等,相應有酶傳感器、全細胞傳感器和免疫傳感器等,尤其是免疫傳感器的應用可大大提高檢測靈敏度并大大縮短檢測時(shí)間。而生物傳感器與光纖技術(shù)結合的產(chǎn)物——光導纖維傳感器,則在快速檢測和在線(xiàn)檢測中有著(zhù)廣闊的應用前景。
8、活體檢測法
活體檢測法是利用活體生物來(lái)進(jìn)行生物測定的技術(shù)。如農藥與細菌作用后可影響細菌的發(fā)光強度,通過(guò)細菌發(fā)光強度,以檢測農藥殘留量。但該法只對少數農藥有反應,無(wú)法辨別殘留的種類(lèi),準確性較低。敏感家蠅檢測方法就是用樣品喂食家蠅,根據家蠅的死亡率測定農藥殘留量。
該技術(shù)方法直接、過(guò)程簡(jiǎn)單、容易掌握,無(wú)需復雜儀器用戶(hù)便可自行檢測,缺點(diǎn)是檢測時(shí)間較長(cháng),定性粗糙準確性低,只對少數農藥有效,而且由于其他生物對不同農藥的毒性反應與人畜可能不同,因此影響對農藥殘留量的判斷。